Covid-19: Diagnóstico Coronavírus com teste de PCR

Além dos exames clínicos iniciais, existem alguns métodos de exames para detectar se um paciente está infectado com o novo Coronavírus (Covid-19). Portanto, para um diagnóstico do Coronavírus COVID-19 (nome dado à doença provocada pelo vírus SARS-CoV-2) eficiente, o principal e mais preciso exame é o RT-PCR (reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa).

Diagnóstico COVID-19

O exame de RT-PCR é o único realmente capaz de detectar diretamente o material genético (RNA) do Coronavírus já nos primeiros dias após a infecção.

Existem ainda os chamados “testes rápidos”. Estes testes precisam de tempo após a infecção, pois detectam a resposta imune do nosso corpo contra o vírus (produção de anticorpos), e não o vírus. Esse tempo de espera é necessário devido ao que chamamos de janela imunológica: a pessoa pode já estar infectada pelo vírus, mas ainda não tem anticorpos contra ele, e, por tanto, por ter um resultado falso negativo. Para este tipo de teste é necessário aguardar que o corpo produza anticorpos contra o patógeno

Sendo assim, o exame de RT-PCR fornece um resultado mais preciso, e eficiente desde a fase inicial da infecção, e pode detectar a presença do novo coronavírus antes mesmo do início dos sintomas.

Conhecendo um pouco do vírus causador da COVID-19

 Os coronavírus pertencem à família Coronaviridae, que inclui quatro gêneros, Alphacoronavirus, Betacoronavirus, Deltacoronavirus e Gammacoronavirus, além de vários subgêneros e espécies. O mais recente coronavírus a surgir em humanos apareceu na cidade de Wuhan, província de Hubei, China em dezembro de 2019 e foi nomeado como SARS-CoV-2.

O que é e para que serve o exame PCR?

 O PCR (reação em cadeia da polimerase) é um método de Biologia Molecular que replica material genético em massa. Pode ser usado para detectar a presença de um DNA previamente determinado através de primers específicos (iniciadores) na amosta. Existe uma variação da técnica, o RT-PCR, é capaz de detectar a presença de RNA na amostra, adicionando uma etapa prévia de transcrição de RNA para DNA por uma enzima chamada transcriptase reversa. Desta forma é possível detectar o material genético alvo em diversos tipos de amostra tais como sangue, saliva, exudatos dentre outros.

Como é feito o exame PCR para coronavírus?

  A amostra para o exame pode ser coletada a partir de uma variedade de fontes respiratórias, incluindo garganta, nasofaringe nasal, escarro e líquido brônquico, com auxílio de uma haste flexível (swab).

Como o vírus é um parasita intracelular, ou seja, fica dentro da célula é preciso iniciar o processo de extração do RNA do vírus. Para isso, realiza-se sucessivas centrifugações, transferindo os produtos com pipetas para romper as células da amostra e separar a fase líquida que contém o material genético. Em seguida, precipita-se e separa-se o material genético total obtido. Todo esse processo ocorre dentro de cabines de fluxo laminar para evitar contaminação da amostra e, consequentemente, garantir a precisão do resultado do exame.

 

Como citado anteriormente, o material genético do coronavírus é o RNA. Para avaliar a presença do vírus por PCR, a enzima transcriptase reversa transcreve o RNA viral em DNA, como se reescrevesse um texto em outro idioma. Esse processo ocorre em um termoshaker, um bloco seco com aquecimento, já que a transcrição natural ocorre de DNA para RNA.

Portanto, desta forma, obtem-se o cDNA, que é o DNA complementar ao RNA do vírus.

Logo…

Portanto, com a amostra purificada contendo o material genético do coronavírus transcrito para cDNA, a quantidade de cada fragmento ainda é muito pequena, e é necessário um aumento numérico exponencial do material genético alvo (material genético do coronavírus). Para isso é necessário ter iniciadores (primers) específicos que vão se ligar em cada fita de cDNA específica do vírus, e em conjunto com uma enzima (DNA polimerase) e nucleotídeos (as “letras” que compõem o DNA – dNTPs) vão gerar novas fitas de DNA. Este processo ocorre dentro de um aparelho chamado termociclador, que multiplica o DNA em escala logarítmica a cada ciclo. Quando o exame multiplica o material genético do vírus, o resultado é positivo. Caso a amostra não tenha o material genético do vírus, não ocorrerá a multiplicação e o resultado do exame será negativo.

Dicas para se prevenir do Coronavírus

•  Lave as mãos com frequência com água e sabão por pelo menos 20 segundos, lavando toda superfície (palma, dorso, entre os dedos e pontas dos dedos);
• Quando não for possível lavar as mãos use álcool em gel ou álcool 70% (veja aqui como é feito o álcool em gel);
• Higienize as superfícies com álcool 70% ou água sanitária/hipoclorito de sódio. Lugares em que as pessoas colocam a mão com frequência como chaves, maçanetas, torneira devem ser higienizados com mais frequência;
• Mantenha a distância de 1,5 metro de outras pessoas;
• Não toque nos olhos, nariz e boca sem higienizar as mãos com água e sabão ou álcool em gel;
• Use máscara ao sair de casa;
• Se sua máscara for de tecido, lave-a com água e sabão e deixe de molho em água sanitária/hipoclorito de sódio por 10 minutos;
• Mantenha sua casa e/ou seu ambiente de trabalho bem arejado (abra portas e janelas).

Dúvidas para Diagnóstico Coronavírus: teste de PCR

1. Quanto tempo leva para ter o resultado do teste RT-PCR?

O resultado do exame leva de 24 h a 48 h para ficar pronto.

2. Onde posso fazer o teste RT-PCR?

As unidades de saúde coletam as amostras dos exames e as encaminham para os Laboratórios Centrais de Saúde Pública (LACEN) dos estados, onde realizam o exame específico (RT-PCR).

3. Por que fazer esse teste RT-PCR?

O médico indica o Teste de Coronavírus (PCR) para pessoas que apresentam sintomas graves, como febre, falta de ar e tosse seca por mais de 24 horas. É necessário o pedido médico para realizar o exame.

4. Como devo me preparar para esse teste?

Não é necessário nenhuma preparação para realizar o Teste de Coronavírus (PCR).

5. Quais são os possíveis resultados?

O teste de Coronavírus (PCR) pode detectar ou não detectar o vírus.

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Veja dicas de como limpar sua cabine de PCR em outro post do nosso blog.

REFERÊNCIAS

Diagnóstico Coronavírus: teste de PCR:

• Figura 1: Estrutura do vírus SARS-CoV-2.   Adaptado da fonte  em 22/04/2020

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